VALIDASI METODE DETEKSI Listeria monocytogenes PADA NAGET AYAM SECARA REAL TIME POLYMERASE CHAIN REACTION (RT-PCR)

Abstract

Naget ayam merupakan makanan yang berisiko terkontaminasi Listeria monocytogenes. Metode standar konvensional memerlukan waktu 5 hari untuk menyimpulkan negatif/25g Listeria monocytogenes. Penelitian bertujuan untuk memvalidasi metode alternatif deteksi Listeria monocytogenes dengan mengkombinasikan metode standar kultur konvensional dan teknologi realtime PCR sehingga dapat mempercepat waktu pengujian menjadi 2 hari untuk menyimpulkan negatif/25g Listeria monocytogenes. Parameter validasi terdiri dari penentuan limit deteksi, uji selektifitas, uji sensitifitas dan robustness. Validasi diawali penentuan konsentrasi bakteri spike yang selanjutnya dilakukan stress bakteri Listeria monocytogenes yang digunakan untuk pengujian. Hasil penelitian menunjukkan limit deteksi metode alternatif  0,7 koloni/25g.  Uji selektifitas dapat mendeteksi bakteri Listeria monocytogenes dan tidak dapat mendeteksi 30 strain bakteri non Listeria monocytogenes. Sensititifitas metode alternatif sama metode standar pada konsentrasi 1,5 koloni/25g dan 4,6 koloni/25g. Metode alternatif robust terhadap perubahan reaksi, waktu dan penguji. Penelitian berhasil memvalidasi metode alternatif yang dapat diterapkan di laboratorium, namun di masa mendatang diperlukan penambahan jumlah bakteri uji eksklusifitas